期刊简介
《中国组织工程研究与临床康复》（原《中国临床康复》）杂志系卫生部主管，中国康复医学会、《中国组织工程研究与临床康复》杂志社主办的国家级学术期刊。经新出报刊[2006]288号批准，《中国临床康复》更名为《中国组织工程研究与临床康复》，变更后国内统一连续出版物号为CN 21-1539/R，ISSN 1673-8225，国内外公开发行，发行代号8-584，周刊，200页/期，A4开本。 更名后的《中国组织工程研究与临床康复》推出2009年的全新策划,年出版53期,各周刊征稿重点邀您参与,请您评估。网址：www.crter.org
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首页>中国组织工程研究杂志
- 杂志名称：中国组织工程研究杂志
- 主管单位：中华人民共和国卫生部
- 主办单位：中国康复医学会,《中国组织工程研究与临床康复》杂志社
- 国际刊号：2095-4344
- 国内刊号：21-1581/R
- 出版周期：周刊
期刊荣誉：百种中国杰出学术期刊期刊收录：维普收录(中), 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 知网收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 剑桥科学文摘, 万方收录(中)
异硫氰酸荧光素标记动态观察天花粉蛋白对黑色素瘤B16细胞的损伤
周欣阳；张天一；顾君一
关键词：天花粉蛋白, 黑色素瘤B16细胞, DNA损伤
摘要：目的:应用异硫氰酸荧光素标记天花粉蛋白,在激光共聚焦显微镜下直接观察天花粉蛋白进入黑色素瘤B16细胞的动态过程并分析其对黑色瘤B16细胞的损伤作用. 方法:实验于2003-08/2004-08在南通大学神经再生重点实验室完成.将常规传代培养的黑色素瘤B16细胞用胰酶消化,以5×109个/L的浓度种植于24孔培养板.将天花粉蛋白、异硫氰酸荧光素-天花粉蛋白、异硫氰酸荧光素-牛血清白蛋白分别加入培养细胞中,终浓度为50 mg/L,同时加入等量生理盐水作为正常对照组,每组再分别设3,6,12 h不同孵育时间组.异硫氰酸荧光素标记天花粉蛋白后,利用激光共聚焦显微镜观察异硫氰酸荧光素-天花粉蛋白进入细胞的过程及其荧光强度,CCK-8细胞毒性实验评估各组细胞存活率、并用单细胞凝胶电泳及hoechst33258染核观察天花粉蛋白对黑色素瘤B16细胞致DNA损伤作用.结果:①终浓度50 mg/L的异硫氰酸荧光素-天花粉蛋白孵育3 h时已经进入黑色素瘤细胞,6 h时进入细胞量达到高,12 h时已轻度下降,各时间点比较差异有统计学意义(P＜0.01).异硫氰酸荧光素-天花粉蛋白组与异硫氰酸荧光素-牛血清白蛋白组荧光强度差异有显著性(P＜0.01).②终浓度50 mg/L异硫氰酸荧光素-天花粉蛋白、天花粉蛋白孵育黑色素瘤细胞3,6 h后利用单细胞电泳和Hoechst33258染色未观察到核形态的变化;但孵育6 h后CCK-8细胞毒性实验显示活细胞数量明显下降;孵育12 h后出现DNA损伤的特征性彗星尾现象,并观察到明显的核浓缩和边集现象,出现特征性凋亡小体.结论:孵育6 h时天花粉蛋白进入细胞量多,但并没有明显的细胞DNA损伤的作用,而孵育12 h时产生明显的细胞毒作用和凋亡的发生.
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