期刊简介
《中国组织工程研究与临床康复》（原《中国临床康复》）杂志系卫生部主管，中国康复医学会、《中国组织工程研究与临床康复》杂志社主办的国家级学术期刊。经新出报刊[2006]288号批准，《中国临床康复》更名为《中国组织工程研究与临床康复》，变更后国内统一连续出版物号为CN 21-1539/R，ISSN 1673-8225，国内外公开发行，发行代号8-584，周刊，200页/期，A4开本。 更名后的《中国组织工程研究与临床康复》推出2009年的全新策划,年出版53期,各周刊征稿重点邀您参与,请您评估。网址：www.crter.org
往期目录
-
1999
-
2000
-
2001
-
2002
-
2003
-
2004
-
2005
-
2006
-
2007
-
2008
-
2009
-
2010
-
2011
-
2012
-
2013
-
2014
-
2015
-
2016
-
2017
-
2018
-
2019
首页>中国组织工程研究杂志
- 杂志名称：中国组织工程研究杂志
- 主管单位：中华人民共和国卫生部
- 主办单位：中国康复医学会,《中国组织工程研究与临床康复》杂志社
- 国际刊号：2095-4344
- 国内刊号：21-1581/R
- 出版周期：周刊
期刊荣誉：百种中国杰出学术期刊期刊收录：维普收录(中), 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 知网收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 剑桥科学文摘, 万方收录(中)
大鼠骨髓间充质干细胞体外分离、纯化与培养适宜条件的筛选
庄淑波；刘毅；陈克明；肖斌
关键词：骨髓间充质干细胞, 细胞培养, 大鼠
摘要：目的:为获得大量、高纯度的骨髓间充质干细胞,筛选体外分离、纯化和培养的适宜条件.方法:实验于2006-08/2007-07在解放军兰州军区兰州总医院进行.①实验材料:2月龄SD大鼠,雄性,体质量(100±20)g,由解放军兰州军区兰州总医院实验动物科提供.②实验方法:分别采用全骨髓法(贴壁筛选法)和密度梯度离心法分离和纯化大鼠骨髓间充质干细胞.将采用密度梯度离心法获得的单个核细胞按1×107,1×107,1.5×108,2×108,1×109,2×109 L-1的接种密度分别分成1～6组,接种在24 孔板内,每组接种6孔.比较细胞出现伸展时间、原代培养时间.于细胞接种后第1,2,3,4,5,6天进行首次换液.将换下的部分细胞置于新的培养皿中进行培养,至少培养3 d,观察是否还有新的贴壁细胞出现,以确定首次换液时间.观察体积分数为0.10,0.12,0.15,0.18,0.20血清对原代及传代后细胞生长的影响,比较不同浓度血清中细胞数量、集落形成率.集落形成率=集落数目/接种细胞数目×100%.采用流式细胞仪检测骨髓间充质干细胞细胞周期.选取第5代扩增的骨髓间充质干细胞,接近完全融合后进行成骨和成脂肪诱导培养.诱导剂分别为:10 nmol/L.地塞米松、0.05 nmol/L抗坏血酸及10 nmol/L β-甘油磷酸钠;1μmol/L地塞米松、0.5 mmol/LIBMX、0.01 mmol/L人胰岛素、0.01 mmol/L吲哚美辛.并设未加诱导剂培养液培养的骨髓间充质干细胞对照.③实验评估:采用碱粒酶测定成骨诱导后细胞,采用油红O染色鉴定成脂肪诱导后细胞.结果:①细胞出现伸展时间、原代培养时间:密度梯度离心法培养细胞出现伸展时间与全骨髓法相比,差异无显著性意义.密度梯度离心法原代培养时间较全骨髓法长[(9.41±1.11),(14.73±2.86)d,P＜0.05].②不同接种密度对密度梯度离心法所获细胞生长影响:1×109 L-1组细胞出现伸展时间及原代培养细胞融合时间较早.1×107 L-1组培养20 d内不能传代.③首次换液时间对细胞生长的影响:第5天开始在换下的液体中,很少有再贴壁的细胞出现.因此首次换液时间应为第5天.④不同体积分数血清对细胞生长的影响:在其他条件相同的前提下,骨髓间充质干细胞在含体积分数为0.12胎牛血清中细胞集落形成率高.⑤成骨及成脂诱导:成骨诱导的骨髓间充质干细胞经碱粒酶测定,结果钙化结节呈蓝色.成脂诱导的骨髓间充质干细胞经油红O染色,苏木精-伊红复染后胞内脂滴呈桔红色,核呈蓝色.结论:采用密度梯度离心法分离纯化的骨髓间充质干细胞以1×109 L-1密度接种,在含体积分数为0.12胎牛血清的MEM培养基中培养,生长状况良好,增殖速度快.
友情链接