期刊简介
《中国组织工程研究与临床康复》（原《中国临床康复》）杂志系卫生部主管，中国康复医学会、《中国组织工程研究与临床康复》杂志社主办的国家级学术期刊。经新出报刊[2006]288号批准，《中国临床康复》更名为《中国组织工程研究与临床康复》，变更后国内统一连续出版物号为CN 21-1539/R，ISSN 1673-8225，国内外公开发行，发行代号8-584，周刊，200页/期，A4开本。 更名后的《中国组织工程研究与临床康复》推出2009年的全新策划,年出版53期,各周刊征稿重点邀您参与,请您评估。网址：www.crter.org
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首页>中国组织工程研究杂志
- 杂志名称：中国组织工程研究杂志
- 主管单位：中华人民共和国卫生部
- 主办单位：中国康复医学会,《中国组织工程研究与临床康复》杂志社
- 国际刊号：2095-4344
- 国内刊号：21-1581/R
- 出版周期：周刊
期刊荣誉：百种中国杰出学术期刊期刊收录：维普收录(中), 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 知网收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 剑桥科学文摘, 万方收录(中)
重组腺病毒对体外培养耳蜗Corti器的转染特性
王苹；杜波；丁大连；杜宝东
关键词：内耳, 重组腺病毒, 基因转染, 组织工程, 细胞工程
摘要：目的:腺病毒载体是在内耳基因治疗的实验研究中应用广泛的载体之一,但载体的靶向性不明显.通过重组腺病毒携带报告基因EGFP转染体外培养耳蜗器官,观察各型细胞的转染特性.方法:实验于2004-08/2006-01在美国纽约州立大学布法罗分校听力耳聋研究中心完成.①实验材料:Fisher大鼠来源于布法罗大学的实验动物中心.AdV/EGFP是Buffalo大学Dr.Lee惠赠.②实验方法:选取出生3 d的大鼠分离获取耳蜗组织.使用携带报告基因-EGFP的重组腺病毒(AdV/EGFP),以1×107,1×108,1×109,2×109V P/mL 作用耳蜗,于感染后6,12,24,48 h和3 d,固定组织,观察感染特性.分离出生3 d的大鼠耳蜗Corti器,基底膜分离后,立即进入2 mL滴度为1×109VP/mL,含2mmol/L 的庆大霉素病毒溶液,作用3 h后平铺到胶粒上,加入含2 mmol/L庆大霉素的生长培养基,作用24 h后收获样品.③实验评估:采用TRITC-labeled phaloidin组织化学染色,荧光显微镜观察绿色荧光蛋白EGFP和TRIC在耳蜗细胞中的表达定位.结果:①重组腺病毒可转染离体培养耳蜗组织中的各种类型细胞,外沟细胞感染率高,其次为齿间细胞.仅有很少部分的毛细胞和螺旋神经元被感染.②在病毒滴度在107～109 VP/mL 的范围内,重组腺病毒感染耳蜗具有剂量依赖性,但大于这个滴度并不会增加感染效率,而且高浓度的重组病毒可造成毛细胞和外沟细胞破坏.③EGFP早于感染后6 h出现,48 h达到高峰,外源基因高表达至少可维持7 d.④庆大霉素损伤所有的毛细胞后,重组腺病毒能够感染多数的Deiters'细胞,齿间细胞的感染效率高于腺病毒对正常耳蜗组织的感染.结论:重组腺病毒转染效率在耳蜗各种类型细胞明显不同,重组腺病毒优先感染耳蜗支持细胞.
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