期刊简介
《中国组织工程研究与临床康复》（原《中国临床康复》）杂志系卫生部主管，中国康复医学会、《中国组织工程研究与临床康复》杂志社主办的国家级学术期刊。经新出报刊[2006]288号批准，《中国临床康复》更名为《中国组织工程研究与临床康复》，变更后国内统一连续出版物号为CN 21-1539/R，ISSN 1673-8225，国内外公开发行，发行代号8-584，周刊，200页/期，A4开本。 更名后的《中国组织工程研究与临床康复》推出2009年的全新策划,年出版53期,各周刊征稿重点邀您参与,请您评估。网址：www.crter.org
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- 杂志名称：中国组织工程研究杂志
- 主管单位：中华人民共和国卫生部
- 主办单位：中国康复医学会,《中国组织工程研究与临床康复》杂志社
- 国际刊号：2095-4344
- 国内刊号：21-1581/R
- 出版周期：周刊
期刊荣誉：百种中国杰出学术期刊期刊收录：维普收录(中), 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 知网收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 剑桥科学文摘, 万方收录(中)
干细胞因子基因cDNA克隆及其在造血干细胞中的表达
胡义；王庆林；赵秀荣；徐大为；宋成军；彭飞；刘年猛；许倩；周晓春；颜勇
关键词：干细胞因子, 基因, 克隆, 表达, 造血干细胞
摘要：目的:克隆人干细胞因子基因cDNA,构建真核表达载体并转导脐带血造血干细胞,观察干细胞因子在造血干细胞中的表达,从而为脐血造血干细胞扩增及移植奠定实验基础.方法:实验于2005-09/12在承德医学院基础医学研究所和湖南师范大学医学院寄生虫病研究室完成.①实验材料:健康胎儿脐带由承德医学院附属医院提供,产妇均签署知情同意书;pcDNA3.1,大肠杆菌E. coliDH5α由本室保存;pUCm-T vector (promega公司);BamHⅠ,XbaⅠ(New England BioLabs公司).②实验方法:无菌收集胎儿脐带,胶原酶+胰蛋白酶+乙二胺四乙酸联合消化,分离培养人脐带内皮细胞.从上述含脐带内皮细胞的培养液中分离提取干细胞因子mRNA,用反转录-聚合酶链反应扩增干细胞因子cDNA.纯化的PCR产物与载体pUCm-T加入连接反应体系,构建及克隆pUCm-T/SCF质粒,其与pcDNA3.1分别进行BamHⅠ、XbaⅠ双酶切反应,产物经琼脂糖凝胶电泳后回收干细胞因子cDNA和pcDNA3.1片段,构建真核表达型载体pcDNA3.1/SCF.以密度梯度法+免疫磁珠法分离收集人脐血CD34+造血干细胞,导入pcDNA3.1/SCF,设立未转导对照组.③实验评估:转导后1～7 d检测两组细胞上清液中干细胞因子水平的表达.结果:①人干细胞因子基因cDNA克隆:扩增的人干细胞因子基因cDNA理论上应为690 bp,实际PCR产物经琼脂糖凝胶电泳后,紫外线下可见一预期大小的条带,证明干细胞因子mRNA提取成功,反转录合成的cDNA完整.②分泌型真核表达质粒pcDNA3.1/SCF的构建:BamH Ⅰ和XbaⅠ双酶切后电泳可见690 bp的插入片段,与干细胞因子基因序列相同,表明分泌型真核表达质粒pcDNA3.1/SCF构建成功.③脐血造血干细胞培养上清中的干细胞因子水平:培养第1～7天,转导pcDNA3.1/SCF的脐血造血干细胞上清中的干细胞因子表达水平均明显高于未转导对照组(P＜0.01).结论:成功克隆人干细胞因子基因cDNA,并构建了重组质粒pcDNA3.1/SCF,该质粒转导脐血造血干细胞后,能在短期内有效表达.
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