葛根总黄酮对过氧化氢所致PC12细胞氧化损伤的防护

摘要：背景:葛根具有防治高血压、心脏病、糖尿病和血液病等多种生物学功效,其提取物对S180肉瘤及Lewis肺癌的增殖有一定抑制作用.目的:观察葛根总黄酮对嗜铬细胞瘤细胞PC12细胞生长的影响和抗过氧化氢所致细胞氧化损伤的防护作用.设计:完全随机分组设计,对照实验.单位:解放军总医院生化科和老年病研究所.材料:葛根购自同仁堂药店,由本实验室用乙醇、乙酸乙酯按常规提取分离提纯葛根总黄酮,用理化方法和薄层色谱进行鉴定,定量测定提取物中葛根素含量为31.79%.四甲基偶氮唑盐(Sigma公司).鲁米诺购自Sigma公司.抗氧化活性试剂用黄嘌呤氧化酶(Sigma公司).PC12细胞为解放军总医院老年病研究所惠赠.方法:实验于2001-01/07在解放军总医院老年病研究所完成.①以20 g/L DMEM细胞培养液(pH 7.1～7.2)培养细胞.将培养细胞按随机抽签法分为2组:葛根总黄酮组和过氧化氢损伤+葛根总黄酮组,其中每组又根据葛根总黄酮的浓度平行分为5个质量浓度进行观察(0,1.0 mg/L,10,100mg/L,1.0 g/L),每组平行培养8 孔,每孔100mL培养液(细胞数为1×109L-1),葛根总黄酮组于37℃条件下,加入葛根总黄酮培养72 h;过氧化氢+葛根总黄酮组:在37℃条件下,加入葛根总黄酮培养48 h后,再加入500 mmol/L过氧化氢,继续培养24 h.②用四甲基偶氮唑盐比色法检测细胞活性;用Griess方法测定培养液中亚硝酸盐含量,用次黄嘌呤/黄嘌呤氧化酶测定培养液中的超氧化物歧化酶活性,以观察葛根总黄酮对PC12细胞生长活性的调控;并外源性加入过氧化氢,观察葛根总黄酮对过氧化氢所致培养PC12细胞氧化损伤的防护作用;结果以抑制率表示[(空白A值-测定A值)/空白A值×100%],抑制率越高,说明培养液中清除O2-的能力越强.③数据间差异比较采用单因素方差分析.主要观察指标:葛根总黄酮对PC12细胞培养液中亚硝酸盐含量、超氧化物歧化酶活性、及细胞活性的影响.结果:①葛根总黄酮对PC12细胞活力的影响:1～10mg/L的葛根总黄酮对PC12细胞的生长无明显影响,100mg/L葛根总黄酮可促进PC12细胞的生长(P＜0.05),当葛根总黄酮在培养液中的浓度增加至1.0g/L时,则表现出明显地抑制细胞生长效能(P＜0.01).培养液中葛根总黄酮浓度在1～100 mg/L内可有效提高过氧化氢损伤组细胞的活力(P＜0.05).②葛根总黄酮对PC12细胞培养液清除O2-的影响:葛根总黄酮组和过氧化氢损伤+葛根总黄酮组清除O2-的能力均随着葛根总黄酮质量浓度的增加而逐渐升高(除外过氧化氢+葛根总黄酮组加入葛根总黄酮lmg/L时),具有明显量效关系.两组均在加入100 mg/L和1 g/L葛根总黄酮时PC12细胞培养液中超氧化物歧化酶活性明显高于未加入葛根总黄酮时(P＜0.05～0.01).③葛根总黄酮对PC12细胞亚硝酸盐的调控:低浓度(1～100 mg/L)的葛根总黄酮使培养细胞亚硝酸盐生成减少,但培养液中葛根总黄酮浓度达1 g/L时,亚硝酸盐生成量则增加.结论:①葛根总黄酮对培养的PC12细胞具有一定生长调控作用,低质量浓度(1～100 mg/L)时促进细胞生长,高质量浓度(1g/L)时抑制细胞生长,但抗氧化能力强.②在培养液中加入1～100 mg/L的葛根总黄酮对过氧化氢所致PC12氧化损伤具有明显防护效能.